Criopreservacion de Celulas

CRIOPRESERVACION DE CELULAS

INTRODUCCION

La criopreservación es el método donde se utilizan bajas temperaturas con el fin de preservar las estructuras intactas de las células vivas. Las células se criopreservan para evitar pérdidas por contaminación, para  minimizar cambios genéticos en líneas continuas y evitar la transformación en líneas finitas. Una criopreservación exitosa de células requiere seguir protocolos estandarizados y reproducibles, aunque cada protocolo puede requerir modificaciones según el tipo celular o línea a usar, para lograr la máxima viabilidad después del descongelamiento. Las células de mamíferos criopreservadas incluyen líneas celulares inmortalizadas, células primarias aisladas a partir de tejidos y células madre. Las células de mamíferos se congelan comúnmente con un criopreservante;  DMSO o glicerol, y se disminuye la temperatura a una velocidad de 1°C/ minuto para evitar  los efectos perjudiciales de la formación de cristales de hielo del agua dentro de la célula. Las herramientas de BioCision de Criopreservación de células incluyen las estaciones de trabajo libre de hielo CoolBox XT y los módulos de congelación CoolCell libre de alcohol, para realizar congelamientos controlados reproducibles.

PREPARACIÓN DE CELULAS

Generalmente la preparación del criovial (o también llamado criotubo), se lleva a cabo bajo condiciones asépticas en una campana de cultivo de células. Las suspensiones celulares suelen ser mantenidas frías (0,5 a 4,0 °C),  por lo que se requiere del uso de hielo fuera de la campana o una unidad de refrigeración libre de hielo dentro de la campana.  La estación de trabajo libre de hielo CoolBox XT de BioCision puede ser utilizada dentro de un ambiente estéril, manteniendo 60 crioviales fríos (0,5 a 4 °C) por más de 16 horas. Las propiedades termo-conductoras  del sistema de refrigeración que está inserto en el interior del núcleo del CoolBox XT y el soporte CoolRack para los crioviales,  asegura la distribución uniforme de la temperatura en todos los crioviales durante el proceso. El CoolBox XT no requiere hielo, electricidad o baterías.

CONGELAMIENTO CELULAR

Generalmente la criopreservación de células requiere una velocidad de congelamiento controlada de -1°C por minuto para la mayoría de los tipos celulares. La congelación se puede realizar en un congelador de reducción de temperatura programada, en un congelador de -80°C ó en un contenedor de hielo seco con un recipiente de congelamiento pasivo a velocidad controlada. Los métodos actuales, tales como los que utilizan los contenedores de congelación a base de alcohol y cajas de poliestireno no proporcionan velocidades de congelación uniforme a todos los crioviales y no son reproducibles. El módulo CoolCell® de congelación de células libre de alcohol proporciona un medio costo-efectivo, con las mismas características de congelación de células de un congelador a -80°C ó contenedor de hielo seco. Las unidades de congelación CoolCell proporcionan una Criopreservación celular uniforme, consistente y reproducible

PROBLEMA
Los contenedores de congelamiento celular a base de alcohol, requieren de un constante abastecimiento de alcohol iso-propílico al 100% para mantener una velocidad aproximada de congelación de -1°C/minuto, resultando en un elevado costo y en la eliminación de residuos peligrosos. Los anillos concéntricos que utiliza este método, impide la congelación uniforme de los crioviales, ya que el calor de los crioviales ubicados en su parte interior debe pasar por los crioviales exteriores.

Snap freezing in dry ice using a CoolRack
SOLUCION

Los contenedores CoolCell de congelación libres de alcohol
, no requieren alcohol o de cualquier otro fluido para controlar la velocidad de congelamiento de -1°C/minuto. El material exterior aislante y el núcleo interno de la aleación, junto con la colocación de los crioviales en forma radialmente simétrica, regulan la velocidad de eliminación del calor en forma uniforme para todos los crioviales. Las congelaciones rápidas son consistentes y altamente reproducibles.

 

Los recipientes de congelación de células CoolCell están disponibles para crioviales de 1, 2 , 5 mL y tubos de suero de 10 mL. La alta capacidad del CoolCell FTS30 permite usar 30 crioviales por cada corrida de congelamiento. Ver todos los modelos CoolCell aquí.

 

TESTIMONIOS

John Gardner- jefe de proyecto de Roslin Cellab
La tecnología proporcionada por estos sistemas permite que el operador trabaje en un entorno de hielo o sin contacto con nitrógeno líquido, lo que beneficia en gran medida el estado de esterilidad cuando se manipulan viales para los procedimientos de cultivo de tejidos. Existe, por supuesto, el valor añadido de la seguridad al utilizar el sistema de congelación instantáneo con nitrógeno líquido a presión ya que no hay contacto con el nitrógeno líquido, ya sea para el operador o el tubo. La opción adicional de utilizar el sistema a 37°C, en un baño de agua, nuevamente sin contacto directo, ayuda a la descongelación de crioviales estériles, llevándose a cabo de una manera consistentemente reproducible. La combinación de un congelamiento controlado con el CoolCell y descongelamiento a temperatura controlada, aumentan en gran medida la reproducibilidad del proceso de congelación –descongelación. Con un incremento en la viabilidad celular y el crecimiento celular después de la descongelación. La versatilidad del sistema es simplemente brillante.

Rohit Gupta- Universidad de Stanford
Llevamos a cabo un registro en el que se procesan grandes cantidades de PBMCs de Criopreservación a largo plazo. Después de probar el CoolCell, evidenciamos una mejora en la viabilidad celular (>90%), a diferencia en los obtenidos con los recipientes de congelación que utilizamos actualmente, y no hay generación de residuos de isopropanol. En general, el CoolCell nos ha demostrado ser una gran herramienta en la Criopreservación.

Matt Donne - UCSF Stem Cell Lab
El CoolCell es más eficiente y más fácil de usar que el  Mr Frosty. Sin la necesidad de añadir alcohol isopropílico, la falta de tapón de rosca, y no tener tiempo de inactividad después de sacarlo del -80°, hace que las células se congelen de una forma mucho más fácil. Tengo planificada la compra del CoolCell en el futuro.

Sam Knight - Ceramisphere (Australia)
Una gran ventaja del CoolCell, es que puede ser utilizado en hielo seco para hacer la congelación si no se cuenta con un congelador de -80°C. Pasé casi un año obteniendo una pésima recuperación de células HeLa viables que son difíciles de almacenar, que habían sido congeladas en hielo seco (en un dispositivo que utilizaba alcohol), entonces compré un CoolCell y ahora puedo utilizar métodos estándares de criopreservación ( DMSO,20% NBS)  y obtener así casi el 100 % de viabilidad.